概述：甜蜜素是食品生產中常用的甜味添加劑，其甜度是蔗糖的30～40倍,控制限量對人們的身體健康有重要意義。《GB 2760-2014 食品添加劑使用標準》中用于界定食品添加劑使用范圍的食品分類系統，白酒屬于蒸餾酒，不允許使用甜蜜素。本方法參照GB/T 5009.97-2003及相關文獻資料，對白酒中的甜蜜素經提取后，在冰浴條件下，與亞硝酸鈉發生重氮化反應生成衍生物環己醇亞硝酸酯，衍生物進入氣相色譜質譜聯用儀進行分離檢測。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
江蘇天瑞儀器股份有限(xian)公司氣(qi)相色譜(pu)-質譜(pu)聯用儀：GC-MS 6800
甜蜜素標準儲備溶液：稱取一定量的甜蜜素標準品（純度為99.0％）于干燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg標準儲備溶液。
試劑均為優級純，試驗用水為二次蒸餾水。
1.2 儀器工作條件
1.2.1
氣相色譜條件
DB-5毛細管色譜（30m ×0.25mm,0.25um）；載氣：氦氣（純度為99.999％），載氣流量1.0mL/min；進樣口溫度250℃，進樣量1.0uL，進樣方式為分流進樣,分流比10:1；程序升溫：初始溫度為40℃，保持時間10min，以25℃/min速率升至270℃，保持時間5min。
1.2.2
質譜條件
電子轟擊離子源（EI），四級桿溫度150℃，接口溫度280℃；采集方式為選擇離子監測掃描（SIM），溶劑延遲時間6min,選擇3個監測離子質荷比（m/z）為55,81,83。
1.3 實驗方法（略）
2 結果與討論
2.1 特征和離子的選擇
甜蜜素的主要衍(yan)生物環己醇亞(ya)硝酸酯作(zuo)為定性(xing)和(he)定量(liang)，如圖(tu)1。保留時間8.511min.定性(xing)離子(zi)（m/z）為55,81,83。定量(liang)離子(zi)為55。質譜圖(tu)見圖(tu)2.
圖1、歡愉素衍生品物在總化合物流色譜圖
Figure 1、 Cyclamate derivatives total ion
chromatogram
圖(tu)2、愛情素繁衍物的質譜圖(tu)
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
圖3、甜蜜的愛(ai)素(su)衍生產品物在SIM掃描儀(yi)掃描下的化合物流(liu)色譜(pu)圖
Figure 3、 Cyclamate
derivative SIM under scanning ion chromatogram
圖(tu)4、浪漫素衍生品物在SIM掃描機下的質譜(pu)圖(tu)
Figure 4、 Cyclamate derivative SIM
under scanning spectrum
2.2 前處理條件選擇
2.2.1 延伸周期采用
準確吸取的1ml甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，衍生反應時間分別設置為10min、20min、30min、40min、50min，考察反應時間對反應的影響。結果表明，隨著時間從10min升至30min，衍生物信號響應值逐漸增加，隨著反應時間的延長，響應值反而出現降低，因此，衍生反應溫度30min最佳。
2.2.2
硫酸濃度的選擇
準確吸取的1mL甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應條件下，加入50g/L的亞硝酸鈉和分別為50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。結果表明，酸度從50g/L至100g/L，反應衍生物信號響應值明顯增加，濃度升高時，響應值出現減少，因此，最終衍生反應酸度為100g/L。
2.2.3 亞硝酸鈉濃度對衍生反應的影響
準確吸取的1ml甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應條件下，加入100g/L的硫酸，和分別為30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亞硝酸鈉。結果表明，酸度從30g/L至50g/L，反應衍生物信號響應值明顯增加，濃度升高時，響應值出現減少，因此，最終亞硝酸鈉衍生反應為50g/L。
3 實驗數據
3.1 精密度和重復性實驗
準確移(yi)取儲備(bei)液(ye)500uL于離心管中，用水(shui)定容20mL按(an)照(zhao)上(shang)述標樣(yang)衍生(sheng)步驟進行(xing)衍生(sheng)化，衍生(sheng)物濃(nong)度為100ug/mL，平行(xing)制(zhi)備(bei)反(fan)應液(ye)6次(ci)，用GC-MS測定。考察衍生(sheng)方法的重現性以及組分(fen)保留(liu)時間和峰面(mian)積(ji)的相對標準偏差，6個平行(xing)樣(yang)的譜(pu)。結果表(biao)明，保留(liu)時間RSD為0.98%，峰面(mian)積(ji)RSD為6.00%,，具(ju)體實(shi)驗數(shu)據如下表(biao)1所示 。
表1、抄襲性測試測試最終結果
Table 1, repeatable test results
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備樣標題
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保持時間段
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補(bu)齊精力RSD%
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峰空間
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峰面積RSD%
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1
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8.611
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0.98%
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96798
|
6.00%
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2
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8.518
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99549
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3
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8.406
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105518
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4
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8.431
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99798
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|
5
|
8.411
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87708
|
|
6
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8.410
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96500
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3.2 線性關系和檢測限
準確吸取濃度為10ug/mL的甜蜜素標準溶液10ul于50ml離心管中對應衍生物濃度分別為2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，按照上述標樣衍生化步驟進行衍生化，進行線性測試。實驗所得線性方程為：y=940.43x-3525.57，線性相關系數為0.9984，如圖5所示。
圖5. 線性關系圖
Figure 5，Linear
3.3 回收率測試
選擇2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的標樣添加濃度，對某品牌白酒進行回收率實驗，每個濃度分別做三次平行樣，按處理樣品的方法處理加標后的樣品并測試，采用外標法定量，測試結果如下表2所示。
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酸度/mg/kg
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回(hui)籠率1/%
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回收分(fen)類(lei)處理率2/%
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收(shou)售率3/%
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大概收回率/%
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2
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109.6
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104.7
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107.7
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107.3
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50
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99.84
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113.7
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103.5
|
105.7
|
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200
|
108.3
|
114.9
|
116.7
|
113.3
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表2、回收率測試結果
Table 2, the recovery test results
3.4 實際樣品測試
按照上述樣品處理(li)方(fang)法對不同品類的白(bai)酒(jiu)樣品進(jin)行(xing)前(qian)處理(li)和衍生(sheng)化，使用GC-MS6800進(jin)行(xing)測(ce)試，測(ce)試結(jie)果如下表3所示：
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原材料
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甜心素的含(han)量(liang)/mg/kg
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酒原材料1
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N.D.
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酒土樣2
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N.D.
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酒圖(tu)紙3
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N.D.
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酒產品(pin)(pin)的樣品(pin)(pin)4
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N.D.
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酒樣件5
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N.D.
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注：“N.D”表示“未檢出”
表3.、酒中甜蜜素含量測試結果
4 結論
本實驗采用GCMS-6800，在SIM掃描模式下對酒中的甜蜜素進行測試和分析，方法穩定可靠，線性范圍好，靈敏度高，受雜質峰的干擾小，能夠有效地對酒中的甜蜜素進行定性定量分析。
