概述：甜蜜素是食品生產中常用的甜味添加劑，其甜度是蔗糖的30～40倍,控制限量對人們的身體健康有重要意義。《GB 2760-2014 食品添加劑使用標準》中用于界定食品添加劑使用范圍的食品分類系統，白酒屬于蒸餾酒，不允許使用甜蜜素。本方法參照GB/T 5009.97-2003及相關文獻資料，對白酒中的甜蜜素經提取后，在冰浴條件下，與亞硝酸鈉發生重氮化反應生成衍生物環己醇亞硝酸酯，衍生物進入氣相色譜質譜聯用儀進行分離檢測。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
江蘇天(tian)瑞儀器股份有限公(gong)司氣(qi)相色(se)譜-質譜聯用儀：GC-MS 6800
甜蜜素標準儲備溶液：稱取一定量的甜蜜素標準品（純度為99.0％）于干燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg標準儲備溶液。
試劑均為優級純，試驗用水為二次蒸餾水。
1.2 儀器工作條件
1.2.1
氣相色譜條件
DB-5毛細管色譜（30m ×0.25mm,0.25um）；載氣：氦氣（純度為99.999％），載氣流量1.0mL/min；進樣口溫度250℃，進樣量1.0uL，進樣方式為分流進樣,分流比10:1；程序升溫：初始溫度為40℃，保持時間10min，以25℃/min速率升至270℃，保持時間5min。
1.2.2
質譜條件
電子轟擊離子源（EI），四級桿溫度150℃，接口溫度280℃；采集方式為選擇離子監測掃描（SIM），溶劑延遲時間6min,選擇3個監測離子質荷比（m/z）為55,81,83。
1.3 實驗方法（略）
2 結果與討論
2.1 特征和離子的選擇
甜(tian)蜜(mi)素的主要衍生物環己醇亞硝酸酯作為(wei)定(ding)(ding)性(xing)和定(ding)(ding)量，如圖1。保留時間8.511min.定(ding)(ding)性(xing)離子(zi)（m/z）為(wei)55,81,83。定(ding)(ding)量離子(zi)為(wei)55。質(zhi)譜圖見圖2.
圖1、甜美素誕生物在總正離子流色譜圖
Figure 1、 Cyclamate derivatives total ion
chromatogram
圖(tu)2、甜膩素衍生(sheng)物(wu)物(wu)的(de)質譜圖(tu)
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
圖(tu)3、超甜素衍生品(pin)物(wu)在SIM掃描(miao)儀掃描(miao)下的(de)亞鐵離子流色譜(pu)圖(tu)
Figure 3、 Cyclamate
derivative SIM under scanning ion chromatogram
圖(tu)4、甜密(mi)素發展(zhan)物在SIM掃描拍照下的(de)質(zhi)譜(pu)圖(tu)
Figure 4、 Cyclamate derivative SIM
under scanning spectrum
2.2 前處理條件選擇
2.2.1 發展時段確定
準確吸取的1ml甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，衍生反應時間分別設置為10min、20min、30min、40min、50min，考察反應時間對反應的影響。結果表明，隨著時間從10min升至30min，衍生物信號響應值逐漸增加，隨著反應時間的延長，響應值反而出現降低，因此，衍生反應溫度30min最佳。
2.2.2
硫酸濃度的選擇
準確吸取的1mL甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應條件下，加入50g/L的亞硝酸鈉和分別為50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。結果表明，酸度從50g/L至100g/L，反應衍生物信號響應值明顯增加，濃度升高時，響應值出現減少，因此，最終衍生反應酸度為100g/L。
2.2.3 亞硝酸鈉濃度對衍生反應的影響
準確吸取的1ml甜蜜素儲備液溶液按照上述衍生步驟進行衍生化衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應條件下，加入100g/L的硫酸，和分別為30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亞硝酸鈉。結果表明，酸度從30g/L至50g/L，反應衍生物信號響應值明顯增加，濃度升高時，響應值出現減少，因此，最終亞硝酸鈉衍生反應為50g/L。
3 實驗數據
3.1 精密度和重復性實驗
準確移取儲備液500uL于(yu)離心管中，用(yong)水定(ding)容20mL按(an)照上述標樣(yang)衍(yan)生(sheng)(sheng)步(bu)驟進行衍(yan)生(sheng)(sheng)化，衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)濃度為100ug/mL，平行制備反應液6次，用(yong)GC-MS測定(ding)。考(kao)察衍(yan)生(sheng)(sheng)方法(fa)的(de)重現(xian)性(xing)以及組分保(bao)留時間和峰面(mian)(mian)積的(de)相對標準偏差(cha)，6個平行樣(yang)的(de)譜。結果表(biao)明，保(bao)留時間RSD為0.98%，峰面(mian)(mian)積RSD為6.00%,，具(ju)體實(shi)驗數據如下表(biao)1所示(shi) 。
表1、相同性測試測試畢竟
Table 1, repeatable test results
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檢樣標題
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繼承期限
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使(shi)用(yong)時間(jian)段RSD%
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峰的面積
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峰(feng)面積RSD%
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1
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8.611
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0.98%
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96798
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6.00%
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2
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8.518
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99549
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3
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8.406
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105518
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4
|
8.431
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99798
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|
5
|
8.411
|
87708
|
|
6
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8.410
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96500
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3.2 線性關系和檢測限
準確吸取濃度為10ug/mL的甜蜜素標準溶液10ul于50ml離心管中對應衍生物濃度分別為2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，按照上述標樣衍生化步驟進行衍生化，進行線性測試。實驗所得線性方程為：y=940.43x-3525.57，線性相關系數為0.9984，如圖5所示。
圖5. 線性關系圖
Figure 5，Linear
3.3 回收率測試
選擇2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的標樣添加濃度，對某品牌白酒進行回收率實驗，每個濃度分別做三次平行樣，按處理樣品的方法處理加標后的樣品并測試，采用外標法定量，測試結果如下表2所示。
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滲透壓/mg/kg
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收廢率1/%
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的(de)回收利用率2/%
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出售率(lv)3/%
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差(cha)不(bu)多(duo)環保(bao)再(zai)生(sheng)資源回(hui)提取率(lv)/%
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2
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109.6
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104.7
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107.7
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107.3
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50
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99.84
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113.7
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103.5
|
105.7
|
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200
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108.3
|
114.9
|
116.7
|
113.3
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表2、回收率測試結果
Table 2, the recovery test results
3.4 實際樣品測試
按照(zhao)上(shang)述樣(yang)品(pin)處理(li)方(fang)法對不同品(pin)類的(de)白(bai)酒樣(yang)品(pin)進行前處理(li)和衍生化(hua)，使(shi)用(yong)GC-MS6800進行測(ce)試，測(ce)試結(jie)果如下(xia)表3所示：
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樣板
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甜心素(su)含氧量/mg/kg
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酒備樣1
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N.D.
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酒原(yuan)輔料(liao)2
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N.D.
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酒試樣3
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N.D.
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酒試樣4
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N.D.
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酒產品(pin)的樣品(pin)5
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N.D.
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注：“N.D”表示“未檢出”
表3.、酒中甜蜜素含量測試結果
4 結論
本實驗采用GCMS-6800，在SIM掃描模式下對酒中的甜蜜素進行測試和分析，方法穩定可靠，線性范圍好，靈敏度高，受雜質峰的干擾小，能夠有效地對酒中的甜蜜素進行定性定量分析。
